应用基因表达谱芯片技术筛选HCV p7蛋白反式调节基因

作者：郭江 成军 洪源 王琦 邢卉春 毛羽

单位：首都医科大学北京地坛医院 内五科 北京 100015 首都医科大学北京地坛医院 传染病研究所 北京 100015

关键词：丙型肝炎病毒 p7蛋白 反式调节

分类号：R5

出版年,卷(期):页码：2010,2(1):5-9

摘要：

目的 应用基因芯片技术对pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)-p7分别转染的HepG2 细胞的基因表达谱进行分析,筛选能被HCV p7蛋白反式调节的靶基因,研究p7蛋白的生物学功能.方法 以含有HCV全基因组的pBRTM质粒作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增p7蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-p7.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并逆转录成cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,有1个基因表达水平显著上调,22个基因表达水平显著下调.结论 HCV p7蛋白是一种反式调节因子,p7基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.

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基金项目：

A国家自然科学基金  B30371288  D1

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